超微量分光光度計(jì)作為常用的核酸、蛋白等生物大分子的定量和表征工具，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)和生物制藥等領(lǐng)域，用戶僅需微量樣品即可獲得濃度及吸光度結(jié)果。然而在日常使用中，一些用戶會(huì)對(duì)測(cè)量結(jié)果有疑慮，尤其是當(dāng)測(cè)量結(jié)果與預(yù)估的結(jié)果出現(xiàn)較大差異，或與使用其他方法的定量結(jié)果有差異時(shí)，用戶往往會(huì)懷疑設(shè)備出現(xiàn)問題或故障。

實(shí)際上，作為精密的分析儀器，設(shè)備出現(xiàn)問題的幾率并不高，尤其是當(dāng)設(shè)備正常使用和日常維護(hù)時(shí)，更多的問題可能由外部因素導(dǎo)致，如樣品的均質(zhì)、顆粒物或氣泡干擾等。本文提所列的方法可幫助您判定設(shè)備的狀態(tài)，以便您放心的進(jìn)行測(cè)量工作。

標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)量

常用的標(biāo)準(zhǔn)品可使用BSA或核酸標(biāo)準(zhǔn)品，可從各試劑廠家購(gòu)買，或使用如BCA定量試劑盒，QUBIT核酸定量試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品。請(qǐng)注意標(biāo)準(zhǔn)品要在效期之內(nèi)，且保存得當(dāng)（通常低溫）。也可以使用設(shè)備廠家提供的小分子化合物標(biāo)準(zhǔn)品，如Implen提供的PHP標(biāo)準(zhǔn)品。標(biāo)準(zhǔn)品是有等級(jí)區(qū)分的，通常附帶有檢定證書的標(biāo)準(zhǔn)品，標(biāo)稱濃度會(huì)更準(zhǔn)確。

    特別指出的是，使用未知濃度的樣品，來評(píng)估不同設(shè)備的測(cè)量結(jié)果，并以其中一臺(tái)作為基準(zhǔn)，判定另外一臺(tái)的準(zhǔn)確性，是完全錯(cuò)誤的。

重復(fù)性測(cè)量

在缺乏標(biāo)準(zhǔn)品，或標(biāo)準(zhǔn)品由于保存不當(dāng)狀態(tài)已存疑時(shí)，可使用未知濃度樣品做重復(fù)性測(cè)試。這可以判斷設(shè)備的穩(wěn)定性，以排除一些潛在問題，如樣品臺(tái)損壞、樣品的非均質(zhì)，成分干擾等。雖然不能確定準(zhǔn)確性誤差，但重復(fù)性很好的設(shè)備，很大幾率是沒有大問題的。當(dāng)然，這需要結(jié)合您的允差要求，綜合考量。

梯度稀釋測(cè)量

使用已知濃度或未知濃度的樣品，均可進(jìn)行梯度稀釋測(cè)量，以驗(yàn)證設(shè)備的線性穩(wěn)定性。使用設(shè)備的標(biāo)準(zhǔn)曲線功能可便捷地完成此項(xiàng)測(cè)試，并給出線性回歸。當(dāng)梯度稀釋的R2趨近于1，設(shè)備的線性完全可滿足廣泛的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)的測(cè)量要求，同時(shí)也可反映設(shè)備的良好狀態(tài)。需要注意的是，梯度稀釋時(shí)要選擇定期校準(zhǔn)過的，準(zhǔn)確性好的移液器，且正確操作。

基線穩(wěn)定性測(cè)量

光源和CCD檢測(cè)器，作為設(shè)備的核心組件，其穩(wěn)定性對(duì)于設(shè)備而言是非常重要的，而基線測(cè)量可以很好地反映這些部件的狀態(tài)。使用水（或空氣）作為空白，并且用水（或空氣）作為樣品，做多次重復(fù)測(cè)量，如果吸光值的漂移很小，通常可反映設(shè)備的光學(xué)系統(tǒng)組件狀態(tài)正常。

光譜曲線

正常的核酸和蛋白質(zhì)樣品，或者其他化合物樣品，都具有典型的吸收曲線。異常的曲線往往說明樣品的問題，或設(shè)備光路系統(tǒng)可能存在的問題。光譜曲線可作為測(cè)量結(jié)果可靠性的參考，且多數(shù)設(shè)備可根據(jù)曲線給出樣品潛在問題的警告。

 通過以上測(cè)試方法，可以評(píng)估設(shè)備的狀態(tài)和試驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性。實(shí)際工作中，由于設(shè)備本身原因?qū)е碌臏y(cè)量不準(zhǔn)確畢竟是占少數(shù)的。規(guī)范操作，正確使用應(yīng)是用戶更應(yīng)關(guān)切的核心。后續(xù)，我們將為您解讀關(guān)于超微量測(cè)量樣品時(shí)的一些常見誤區(qū)，希望您持續(xù)關(guān)注，更加愜意地使用您的Nanophotometer?。